气溶胶喷雾灭菌性能测试舱是针对消毒剂或消毒器械使用喷雾消毒后，对空气中的气溶胶喷雾的消毒效果进行开发研究，从而建立企业的检测方法。下面我们通过六级筛孔空气撞击式采样法进行试验，建立空气喷雾消毒效果试验的检验方法。

试验设备：环仪仪器 20m³气溶胶喷雾灭菌性能测试舱；过氧化氢消毒机

试验材料：15% 过氧化氢消毒液、白色葡萄球菌 8032、磷酸盐缓冲液、中和剂溶液等

试验仪器：生物安全柜、气溶胶发生器、六级筛孔撞击式采样器等

试验步骤：

（1）打开两个 20 m³测试舱的开关，然后设置两个 20m³测试舱的温度和相对湿度，其温度为 22.5 ℃、相对湿度为 60%，然后观察一定时间，待温湿度恒定在所调数值左右再进行下一步；

（2）将已加好 15% 过氧化氢消毒液的过氧化氢消毒机、已加好菌悬液的气溶胶发生器等全部放入测试舱内，并连接好电源，然后将测试舱的门关闭；

（3）打开气溶胶发生器开关，进行喷雾染菌，同时打开风扇开关，用风扇进行搅拌。喷雾染菌结束后，关闭气溶胶发生器，风扇继续搅拌 5 min，最后需要静置 5 min，确保细菌均匀分布于空气中。

将两个气雾舱分别标记为对照组和试验组空气舱，然后用已连接好的六级筛孔撞击式采样器（里面装有NA平板）分别对两个气雾室进行采样。

将采样气体管的进气口放在舱中央离地 1 米高处，然后采样口连接六级筛孔空气撞击式采样器（装有 NA 琼脂平板），按照采样速度 28. 3 L/min，采样时间 0. 5 min 进行采样，分别为消毒处理前对照组和试验组的阳性对照（即污染菌量），应在 5.0×10^4~5.0×10^6 CFU/m³之间；

（4）用遥控器打开过氧化氢消毒机，点击“开始”按钮，让设备按照 2 mL/m³ 进行喷雾15% 过氧化氢消毒液，在试验空气舱内进行消毒，对照组空气舱同时进行相应处理，即将 15% 过氧化氢消毒液更换为无菌水，进行相同的操作；

（5）喷雾结束后，作用 2 h，用已连接好的六级筛孔撞击式采样器 （里面装有含中和剂的 NA 平板） 分别对两个气雾室进行采样，采样速度为 28. 3 L/min，采样时间 5 min，对试验组和对照空气舱同时进行采样；

（6）采样结束后，将所有的平板直接放入（36±1℃）恒温培养箱中培养 48 h，然后观察结果，进行菌落计数；

（7）同时设置阴性对照组，即用同批次未用的培养基等同时进行培养。阴性对照组应无菌生长，否则试验失败，需更换试剂重新进行试验；

（8）试验重复 3 次。

试验结果：

≥200 mg/L 的硫代硫酸钠的普通营养琼脂培养基对白色葡萄球菌有明显的抑制作用，而在其中添加≥50%D/E中和肉汤后，其抑制作用消失，但只有当其中添加≥2 倍浓度D/E 中和肉汤后，中和剂鉴定试验结果才满足评价规定，第 1组~第 3 组菌量在 50 CFU/平板~300 CFU/平板之间，三组间菌落数误差率不超过 15%，第 4 组无菌生长，且连续 3 次试验合格。

如有试验疑问，可以咨询环仪仪器相关技术人员。